PhytoCellTechTM Malus Domestica : Stem cell พืช ในการปกป้อง stem cell ผิว
ปฏิวัติเทคโนโลยีในการปกป้อง stem cell ของผิว

          PhytoCellTechTM Malus Domestica เป็นระบบ liposome ที่บรรจุ stem cell ของ apple จากประเทศ
สวิสเซอร์แลนด์ ซึ่งเป็นที่รู้จักกันดีว่า สามารถเก็บไว้ได้นานโดยไม่เหี่ยวย่น

         ทาง Mibelle Biochemistry ได้ทำการพัฒนาเทคโนโลยีนวัตใหม่ โดยเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช ซึ่งเราเรียก
เทคโนโลยีนี้ว่า PhytoCellTechTM (PCT) ทำให้ได้ stem cell ของพืชและนำมาใช้ใน cosmetics products เพื่อทำให้
stem cell มีอายุยาวนานขึ้น

         โดยการใช้ PCT ในการปกป้อง stem cell แสดงให้เห็นดังผลการทดลองแบบ in vitro และมีการการศึกษาให้
เห็นถึงการชะลอความเสื่อมและลดรอยเหี่ยวย่นของผิวได้ ดังนั้น PCT จึงเป็นการค้นพบครั้งยิ่งใหญ่เกี่ยวกับสาร antiaging
ที่เตรียมได้จากเทคโนโลยีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่เป็น Innovative technology

INCI Name
         Malus Domestica Fruit cell culture (and) Xanthan gum (and) Glycerin (and) Lecithin (and) Phenoxy Ethanol (and) Aqua/water
ปริมาณที่แนะนำ 2-5%

Application
          - ผลิตภัณฑ์ Skin care ในการปกป้อง stem cell ผิว
          - ผลิตภัณฑ์ดูแลหน้าและตัว เพื่อความอ่อนเยาว์อย่างแท้จริง
          - ผลิตภัณฑ์ Skin care ที่เป็น innovative นำสมัย

Claim PCT
         - ปกป้อง stem cell ผิวให้มีอายุยืนยาวขึ้น (Protect longevity of skin stem cells)
         - ชะลอความเสื่อมของ cell สำคัญในผิว (Delays senescence of essential cell)
         - ต่อสู้กับริ้วรอยที่เกิดตามวัย (Chronological Aging)
         - เก็บรักษาความอ่อนเยาว์และความสดใสให้กับผิว

Swiss Apple stem cells to protect skin stem cells 
         Apple จากประเทศสวิสเซอร์แลนด์พันธุ์ Uttwiler Spätlauber
เป็นผลไม้มีคุณสมบัติอันน่าทึ่ง คือ เก็บไว้ได้นานโดยไม่เหี่ยวย่น
ดังนั้นผู้คนในศตวรรษที่ 18 จึงนิยมเก็บเป็นอาหารในช่วงฤดูหนาว
แต่เนื่องจากมันมีรสเปรี้ยว ในปัจจุบันจึงไม่เป็นที่นิยม
ทำให้มันเป็นพืชที่หายาก และใกล้สูญพันธุ์

          Apple พันธุ์ Uttwiler Spatlauber มี long-live cell ทำให้เก็บไว้ได้นาน
นอกจากนี้ยังมี Phytonutrient (สารอาหารที่ได้จากพืช) และ Protein จึงทำให้
Apple เป็นผลไม้ที่มีประโยชน์มาก

คุณสมบัติของ Stem cell
Stem cell เป็นที่มีคุณสมบัติพิเศษ 2 แบบ คือ

          1. Differentiation เป็นการทำให้เซลล์มีคุณสมบัติที่มีหน้าที่เฉพาะอย่าง กลายเป็นอวัยวะต่างๆ ซึ่งเซลล์ชนิดนี้
มักพบในพืช(เซลล์ของพืชมีคุณสมบัติในการเปลี่ยนเป็น กิ่ง ใบ ดอก) หรือ ตัวอ่อนที่เพิ่งปฏิสนธิ (ช่วงที่สร้าง
เนื้อเยื่อต่างๆ กระดูก เลือด) ในมนุษย์

          2. Self Renewal เป็นการแบ่งเซลล์เพิ่มจำนวนอย่างเดียว ไม่เปลี่ยนหน้าที่ของตนเอง ( Dedifferentiate
Cell)โดยการแบ่งตัวจะเป็นการ จำลองลักษณะของตัวมันเอง ซึ่งเซลล์ใหม่ที่ได้จากการจำลองลักษณะของ
ตัวมันเอง จะมีหน้าที่และคุณสมบัติเหมือนเซลล์แม่( Mother cell) ซึ่งมักใช้ในการสร้างเซลล์ที่ถูกทำลายไป
หรือ ซ่อมแซมส่วนที่สึกหรอ
ปัจจุบันในทางการแพทย์มีการใช้ Stem cell ในการปลูกถ่ายเป็นยาเพื่อรักษา Leukemia และแผลไฟไหม้
รุนแรง ในทาง cosmetic มีการวิจัย stem cell ของผิว เพื่อช่วยให้เข้าใจถึงการปกป้อง skin stem cell ยิ่งขึ้น
ชนิดของ stem cell ในผิว แบ่งเป็น 2 ชนิด คือ

                              1.  Epithelial skin stem cell ซึ่งอยู่ในชั้น basal layer ของ epidermis

                              2.  Hair bulge stem cell ซึ่งอยู่ใน hair follicle (เซลล์รากผม)

          ซึ่ง Epidermal stem cell ช่วยเติมและรักษาสมดุลของเซลล์ในเนื้อเยื่อผิว และสร้างเนื้อเยื่อใหม่ที่ถูกทำลาย
ไป แต่เมื่ออายุมากขึ้น จำนวน stem cell ในผิวลดลง ทำให้ความสามารถในการซ่อมแซมผิวนั้นมีประสิทธิภาพลดลง

Plant stem cell ในการปกป้อง skin stem cell

          Stem cell ทุกเซลล์ (ทั้งของเซลล์พืช และสัตว์) จะมี epigenetic factor ซึ่งเป็นปัจจัยสำคัญในการสร้างเซลล์
ใหม่ โดยเซลล์ใหม่ที่สร้างขึ้นจะมีลักษณะและองค์ประกอบทางพันธุกรรมสมบูรณ์แบบเหมือนต้นแม่ ซึ่งเจริญและ
พัฒนาต่อไปได้
          ใน PCT มี epigenetic factor อยู่มาก (epigenetic factor เป็นปัจจัยในการสร้าง cell ใหม่ของ stem cell )
และ metabolite ในเซลล์ เพื่อจึ่งมั่นใจในได้ว่า PCT เพิ่มการปกป้อง stem cell และมีอายุยืนนานกว่าเดิม

PCT Biotechnology ที่เป็น Innovative technology เพื่อการเพาะเนื้อเยื่อจากพืชที่หายาก

          Mibelle ได้พัฒนา Innovative technology(PCT) ซึ่งเป็นการเพาะเนื้อเยื่อจากพืชที่หายากและใกล้สูญพันธุ์
ซึ่ง PCT มีพื้นฐานจาก totipotency (เซลล์พืชเดี่ยวๆ ทุก cell จะมีลักษณะและองค์ประกอบทางพันธุกรรมสมบูรณ์
แบบเหมือนต้นแม่ ซึ่งเจริญและพัฒนาเป็นพืชทั้งต้น) ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะตัว โดยเป็นกลไกใช้รักษาบาดแผลของพืช
โดยส่วนของพืชที่ถูกทำให้เป็นแผลจะนำไปสู่การเกิด Callus cell (เนื้อเยื่อที่ใช้รักษาแผล) โดย Callus cell จะทำให้
เซลล์พืชซึ่งปกติจะเป็น Differentiate cell กลายเป็น Dedifferentiate cell (Stem cell) เพื่อรักษาเนื้อเยื่อที่ถูกทำลาย
จากนั้น จะนำ Stem cell ที่ได้ไปเพาะเลี้ยงใน suspension จนได้เป็น large scale culture
          ซึ่ง stem cell เหล่านี้จะถูกเก็บและนำไป homogenize และบรรจุใน liposome

ขั้นตอนการผลิต PCT

1. เลือกเอาชิ้นส่วนเล็กๆ ของพืช
2. ทำให้พืชเป็นแผล ซึ่งนำไปสู่การเกิด callus
3. incubation ใน agar plate (อาหารเพาะเชื้อ)
4. เก็บ callus ที่พัฒนาขึ้น
5. เพาะจน dedifferentiation cell จนสมบูรณ์ ให้ได้ stem cell
6. ถ่าย stem cell เข้าใน suspension (liquid media)
7. ทำ stem cell ให้แตกออก
8. บรรจุ stem cell content ใน liposome

ข้อดีของ PCT ซึ่งได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ
- สามารถเพาะเนื้อเยื่อจากพืชที่หายากและใกล้สูญพันธุ์ได้ และยังปกป้องธรรมชาติไม่ให้ถูกทำลาย
- นำพืชที่มาทำเป็นวัตถุดิบ โดยไม่คำนึงถึงฤดูกาลและความต้องการของตลาด
- พืชที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ จะปราศจากมลพิษและสารฆ่าแมลงโดยสิ้นเชิง
- ความเข้มข้นของ metabolite ใน stem cell คงที่

ผลการทดสอบของ PCT
1. คงไว้ซึ่งการเพิ่ม stem cell
การทดสอบแบบ in vitro ในส่วน umbilical cord blood (UCBSC)
(เซลล์สายสะดือ ซึ่งเป็น stem cell ที่มีอายุน้อยสุด) ด้วยสารสกัดจาก
Malus Domestica stem cell ซึ่งเป็นสารใน PCT โดยผลการ
ทดสอบซึ่งเจริญเติบโตแบบ artificial วัดโดยการนับ
จำนวนเซลล์หลังจาก incubate ด้วยสารสกัด
ซึ่งผลแสดงว่าสารสกัด มีผลในการเพิ่ม
จำนวนเซลล์ UCBSC ดังรูป

2. ปกป้องการทำลายเซลล์จากรังสี UV

         มีผลทดสอบแบบ in vitro ในการป้องกันการ
ทำลายเซลล์รังสี UV โดยนำ umbilical cord blood
(UCBSC) ไป incubate ด้วยสารสกัด Malus
Domestica stem cell ที่ความเข้มข้นต่างกันเป็นเวลา
24 ชม. จากนั้นนำวิเคราะห์ด้วย MTS assay ซึ่งเป็น
การวัดจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตและถูกทำลายจากรังสี
UV โดยวัดจำนวนเซลล์หลังจากฉายรังสี UV แล้ว48
ชม.
พบว่าผลของสารสกัด Malus Domestica stem
cell จะช่วยปกป้อง UCBSC จากการทำลายของรังสี
UV แม้ที่ความเข้มข้นต่ำ ดังรูป

 3.  ประสิทธิภาพในการ gene expression ใน senescent Dermal fibroblasts

          เมื่อใส่ H2O2 ลงใน cellular model ของ premature senescence ที่ถูกสร้างบน normal human dermal
fibroblast จะแสดงสัญญาณชนิดต่างๆของการทำลายเซลล์ให้เสื่อมลง ซึ่ง โมเดลนี้ใช้ในการพิสูจน์คุณสมบัติ antisenescence
(ต่อต้านการชราของเซลล์) ของสารสกัด Malus Domestica stem cell
          หลังจาก treat ด้วย H2O2 เป็นเวลา 2 ชม. จากนั้นนำ fibroblast cell ไปแช่ในสารสกัด Malus Domestica
stem cell ที่เข้มข้น 2% เป็นเวลา 144 ชม. ซึ่ง gene expression ถูกวิเคราะห์ด้วย DNA array system comprising
150 probes โดยผลแสดงให้เห็นว่าสารสกัด Malus Domestica stem cell ช่วยเพิ่ม specific gene ได้ดังตาราง ซึ่ง
Gene expression แต่ละตัวมีคุณสมบัติ คือ

          - Cyclin b1 นำไปสู่การ proliferation
          - Cyclin e1: tumor inducer
          - P53: tumor suppressor gene
          - Insulin-like growth factor 2: ตัวเพิ่ม cell proliferation
          - Heme oxigenase 1: anti oxidant enzyme โดย มีคุณสมบัติที่เกี่ยวข้องกับ
          - Delay of senescence (การชะลอการเสื่อมของเซลล์)
          - ปกป้อง oxidative stress
          - ซ่อมแซม DNA ของเซลล์

 4. การชะลออายุของ human Hair follicle

        ทดสอลโดยแยกเซลล์รากผมของมนุษย์ออกมาจาก
  ผิวโดยวิธี microdissection (หลังจากการทำface lift )
  Hair follicle เป็น อวัยวะเล็กๆที่แสดง coculture
  model ตามธรรมชาติของ Epidermal , melanocyte stem
  cell และ differentiate cell in follicle (รูขุมขน)
  Growth medium ที่ทำให้มัน Elongate ขึ้นจนถึง
  วันที่ 14 จากนั้นเซลล์รากผมก็จะค่อยๆ แก่ลงจนไปสู่
  apoptosis (กระบวนการตายของเซลล์) การชะลอการเกิด
  necrosis process (การตายของเนี้อเยื่อหรือกลุ่มของเซลล์)
  ทำโดยการทดสอบ isolated human hair follicle โดย
  incubate กับ Malus Domestica stem cell

         ซึ่งการทดสอบที่ 0.2%ของ extract แม้ปริมาณน้อย แต่ช่วยชะลอการแก่ของเซลล์และกระบวนการ apoptosis ได้
โดย follicle ที่ใส่ในสารสกัด malus domestica stem cell จะช่วยให้เกิดการ elongate จนวันที่18 (ดังรูป)
ในขณะที่ control follicle จะเริ่มหดตัวหลังวันที่14

5. การลดเลือนรอยตีนกา

          ประสิทธิภาพการลดริ้วรอยของ PCT วัดโดยทดสอบกับผู้ทดสอบ 20 คน ช่วงอายุ37-64 ปี โดยใช้ emusion
ที่มีความเข้มข้นของ PCT ปริมาณ 2% ทา 2 ครั้งต่อวัน ใช้เวลาทดสอบ 28 วัน วัดความลึกของรอยตีนกาซึ่งวิเคราะห์
โดย means of PRIMOS (phase-shifting rapid in-vivo measurement ของผิว)

         
          จากรูปแสดงให้เห็นว่า ความลึกของริ้วรอยลดลงอย่างเห็นได้ชัดเจน ถือเป็นจำนวน 100% ของผู้ทดสอบที่
พบว่า ริ้วรอยลดลง

Marketing benefits
          - stem cell จากพืชชนิดแรก ในตลาด(patent ponding)
          - นวัตกรรมใหม่ใน stem cell cosmetic
          - การค้นพบครั้งยิ่งใหญ่ของ anti-aging (Break-through in anti-aging)

การทดสอบ Dermatological tolerance
ทำโดยใช้วิธี occlusive photo patch test พบว่า ไม่เกิดการแพ้